出口食品中食源性病毒定量检测 数字PCR法 第8部分：甲型肝炎病毒
1 范围
本标准规定了出口食品中甲型肝炎病毒（HAV）的数字PCR定量检测方法。适用于贝类、蔬菜、水果、饮用水等食品中HAV的检测。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
3 方法原理
采用免疫磁珠法富集食品样品中的HAV病毒颗粒，提取病毒RNA，反转录为cDNA后，利用数字PCR技术进行定量检测。
4 试剂和材料
- 磁珠法病毒RNA提取试剂盒
- 反转录试剂
- 数字PCR预混液
- HAV特异性引物和探针
- HAV阳性对照和阴性对照
5 仪器和设备
- 数字PCR仪
- 高速冷冻离心机
- 磁力架
- 恒温培养箱
- 微量移液器
6 分析步骤
6.1 样品制备
称取25g样品，加入PBS缓冲液均质，离心取上清液。
6.2 病毒富集
将免疫磁珠加入上清液中，室温孵育30分钟，磁力架收集磁珠。
6.3 RNA提取
使用病毒RNA提取试剂盒提取磁珠中的病毒RNA。
6.4 反转录
将提取的RNA反转录为cDNA。
6.5 数字PCR检测
将cDNA、引物探针和预混液混合后上机检测，设置阳性对照和阴性对照。
7 结果计算
根据数字PCR仪输出的阳性微滴数和总微滴数，计算样品中HAV的浓度，以copies/g表示。
8 检出限
本方法的检出限为10²copies/g。
